Метилотрофные бактерии - источники изотопно-меченных Н-2 и С-13 аминокислот - рефераты, скачать рефераты, бесплатно рефераты

Главная: Рефераты

Рефераты. Метилотрофные бактерии - источники изотопно-меченных Н-2 и С-13 аминокислот

Н2О и 1 об.% 13СН3ОН

Культуральная жидкость после биомасса биомасса Культуральная жидкость после отделения от клеток отделения от клеток

2Н-секретируемые аминокислоты 13С-секретируемые аминокислоты

Гидролиз суммарных белков в

4н. Ва(ОН)2 или 6 н. 2НСl ( в 2Н2О)

2Н-и 13С-аминокислоты в

составе белковых гидролизатов

Обработка DnsCl и CH2N2 Обработка ZСl

Оценка уровней изотопного Обращённо-фазовая Обращённо-фазовая ВЭЖХ

включения методом масс- ВЭЖХ метиловых Z-производных аминокислот

спектрометрии метиловых эфиров дансил- аминокислот

эфиров дансил-аминокислот аминокислот

Оценка уровней изотопного

Схема

Адаптация метилотрофных бактерий к средам, содержащим максимальные концентрации 2Н2О и получения 2Н-и 13С-аминокислот.

Изучение ростовых характеристик M. flagellatum на средах, содержащих СН3ОН/С2Н3О2Н/13СН3ОН и 2Н2О.

Данные по росту штамма М. flagellatum на минимальных средах, с 1 об.% СН3ОН (С2Н3О2Н/13СН3ОН) и содержащих ступенчато увеличивающиеся концентрации тяжёлой воды приведены в таблице 1. Как видно из таблицы 1, на средах, содержащих обычную воду и аналоги метанола С2Н3О2Н и 13СН3ОН выходы микробной биомассы составили 81% и 72% соответственно, а на средах с 74,5 об.% 2Н2О выход биомассы составил 29%, что в 3,4 раза ниже, чем в контрольных экспериментах, когда использовали простую воду и метанол (табл. 1, опыты 1, 3, 8). Как видно из таблицы 1, устойчивый рост у M. flagellatum сохранялся лишь в средах, содержащих меньше чем 74,5 об.% 2Н2О. Выше этой концентрации наблюдалось ингибирование роста.

Таблица 1.

Влияние изотопного состава среды на рост штамма M. flagellaum.

Номер Компоненты среды, об% Величина Выход Время опыта лаг-фазы биомассы генер. Н2О 2Н2О СН3ОН С2Н3О2Н часы % ч
1	99,0	0	1,0	0	20,0	100	1,1
2	99,0	0	0,5	0,5	21,3	91,0	0,8
3	99,0	0	0	1,0	22,4	81,0	1,0
4	49,5	49,5	1,0	0	50,8	76,0	1,4
5	49,5	49,5	0,5	0,5	52,0	75,0	1,2
6	49,5	49,5	0	1,0	58,5	70,0	1,3
7	24,5	74,5	1,0	0	60,0	29,0	1,4
8	99,9	0	13СН3ОН 1,0	0	20,8	72,0	1,0

Как и следует из литературных данных, введение стабильного изотопа 13С не приводит к летальным последствиям для клетки, что мы и наблюдали в случае с M. flagellatum. В целом, полученные для M. flagellatum данные могут свидетельствовать о том, что адаптация к 2Н2О определяется как видовой специфичностью метилотрофных бактерий, так и особенностями их метаболизма.

Изучение ростовых и биосинтетических характеристик B. methylicum на средах, содержащих СН3ОН/С2Н3О2Н и 2Н2О.

Данные по росту исходного и адаптированного к 2Н2О штамма B. methylicum и максимальному уровню накопления L-фенилаланина в культуральной жидкости на минимальных средах, содержащих 2 об.% СН3ОН (С2Н3О2Н) и ступенчато увеличивающиеся концентрации тяжёлой воды представлены в таблице 2. Как видно из этих данных, в отсутствие дейтерий-меченных субстратов продолжительность лаг-фазы не превышала 24 ч (см. таблицу 2, опыт 1). С увеличением концентрации 2Н2О в среде продолжительность лаг-фазы увеличивалась до 64,4 ч на средах с 98 об.% 2Н2О и 2 об.% С2Н3О2Н (таблица 2, опыт 10). Отмечено, что длительность времени клеточной генерации с увеличением степени изотопного насыщения среды дейтерием постепенно увеличивается, достигая 4,9 часов на максимально дейтерированной среде. Как видно из табл. 2, опыт 2, С2Н3О2Н не вызывал существенного ингибирования роста и не оказывал влияния на выходе микробной биомассы, в то время как на средах с 98 об.% 2Н2О микробный рост подавлялся. Так, на среде, содержащей 98 об.% 2Н2О и 2 об.% С2Н3О2Н, выход микробной биомассы был снижен в 3,3 раза по-сравнению с контролем. Важно, что выход микробной биомассы, время клеточной генерации и уровень накопления L-фенилаланина в культуральной жидкости при росте адаптированного к 2H2O штамма B. methylicum на среде, содержащей 98 об.% 2Н2О и 2 об.% С2Н3О2Н изменяются незначительно (табл. 2, опыт 10').

Таблица 2.

Влияние изотопного состава среды на рост штамма B. methylicum и уровень накопления L-фенилаланина в культуральной жидкости.

Номер Компоненты среды, об% Величина Выход Время ген. Уровень опыта лаг-фазы биомассы часы секреции Н2О 2Н2О СН3ОН С2Н3О2Н часы % L-Phe, %
1	98	0	2	0	24,0	100	2,2	100
2	98	0	0	2	30,3	92,3	2,4	99,1
3	73,5	24,5	2	0	32,1	90,6	2,4	96,3
4	73,5	24,5	0	2	34,7	85,9	2,6	97,1
5	49,0	49,0	2	0	40,5	70,1	3,0	98,0
6	49,0	49,0	0	2	44,2	60,5	3,2	98,8
7	24,5	73,5	2	0	45,8	56,4	3,5	90,4
8	24,5	73,5	0	2	49,0	47,2	3,8	87,6
9	0	98,0	2	0	60,5	32,9	4,4	79,5
10	0	98,0	0	2	64,4	30,1	4,9	71,5
10'	0	98,0	0	2	39,9	87,0	2,9	95,0

Страницы: 1, 2, 3