В комплексные среды обычно входят различные естественные продукты, богатые органическими соединениями, и отходы ряда производств, а также они значительно дешевле, более доступны и поэтому чаще используются в промышленности. Их компонентами могут быть отруби, мука различных злаков, меласса, гидрол, кукурузный экстракт, выжимки плодов и овощей, жмыхи, замочные воды, барда спиртовых заводов, картофельная мезга и прочие отходы картофеле- и кукурузокрахмального производства, а также других пищевых производств.
Для поверхностного культивирования используют пшеничные отруби; они должны быть крупнолопастными, без горького или кисловатого привкуса. Отруби содержат от 16 до 20% крахмала, 10-12% белка, в том числе важнейшие аминокислоты (в%): метионин - 0,19; цистин - 0,30; аргинин - 1,0; лизин - 0,60; триптофан - 0,30; жир - 3,0-4,0; клетчатка - 10-30; зольные элементы (Nа - 0,09, К - 1,00, Са - 0,16, Р - 0,94); микроэлементы и некоторые другие вещества. Пшеничные отруби - сырье дорогостоящее, поэтому их можно частично заменять другими компонентами. Водимый дополнительный компонент может играть роль рыхлителя среды или же обогащать ее недостающими ростовыми и питательными веществами. Такими компонентами являются солодовые ростки, шелуха крупяных культур, свекловичный жом, древесные опилки, выжимки плодов, овощей и ягод.
При обработке кукурузного зерна в крахмало-паточном производстве в замочные воды переходит до 8% сухого вещества. Кукурузный экстракт - это замочные воды, упаренные в двух- трехкорпусных вакуум-выпарных аппаратах до содержания сухого вещества 48-50%. Он не имеет постоянного состава, что является его недостатком. Кукурузный экстракт содержит большое количество меланоидинов и поэтому имеет темно-коричневый цвет. Он стабилен при хранении и широко применяется в ферментной промышленности.
Кукурузный экстракт является источником азотистых веществ, которые составляют 40-50% общего содержания сухого вещества в экстракте. Углеводы являются нестабильным компонентом экстракта и могут под действием молочнокислых бактерий полностью превращаться в молочную кислоту, содержание которой при этом возрастает до 25%. В экстракте в больших количествах содержатся фосфор, калий и магний. Содержание зольных элементов составляет 15-20% сухого вещества экстракта, а содержание фосфора может достигать 5%. Экстракт содержит все необходимые для микроорганизмов элементы, витамины группы В, ростовые вещества и биостимуляторы.
Крахмал картофельный и кукурузный выпускается четырех сортов (высший,I, II и III). Основное сортовое отличие крахмалов заключается в содержании зольных элементов, которое повышается от высшего сорта к III с 0,35 до 1,20%. Повышается также кислотность на сухое вещество (в мл 0,1 н. раствора HCI) 18 до 30, увеличивается число разрушенных крахмальных зерен. Кукурузный крахмал в своем составе имеет (в %) : крахмал - 98,5-98,8; белок - 0,60-0,35; жир - 0,62-0,70; зола - 0,17-0,12; растворимые вещества - 0,01-0,05; прочие сухие вещества - 0,10-0,13.
Гидрол является отходом производства глюкозы из крахмала. Он представляет собой густой темный сироп, содержащий от 67 до 72% редуцирующих сахаров. Гидрол не стандартен по составу. Основным сахаром гидрола является глюкоза, содержание которой достигает до 80% общей суммы редуцирующих сахаров. Гидрол содержит некоторое количество органических кислот, рН гидрола около 4,0, зольность около 7%. В минеральный состав гидрола входят фосфор, магний, натрий, железо. Используются и другие отходы переработки кукурузы.
Соевая мука выпускается трех видов: необезжиренная, полуобезжиренная и обезжиренная. Соевая мука является богатым источником азотистых веществ, особенно белков. В ней содержится около 25% углеводов; крахмала и глюкозы почти нет (0,5-1,0%), но есть сахароза (5-10%), пентозаны, мальтоза, раффиноза, гемицеллюлозы, декстрины. Минеральный состав соевой муки богат и разнообразен, зольные элементы составляют 4,5-6,5%. В их число входят калий, магний, кальций, натрий, железо, кремний, сера, хлор, медь, марганец, цинк, никель, фосфор. В соевой муке содержатся витамины группы В, D и А.
Состав кукурузной муки зависит от сорта перерабатываемой кукурузы. Кукурузная мука содержит 67-70% крахмала и около 10% других углеводов (сахара, клетчатка, пентозаны и т. д.). Белка в кукурузной муке мало - 10-12%, зольные элементы составляют только 0,3-1,0%, а жир - около 4%.
Солодовые ростки получаются в процессе обработки отсушенного солода в пивоварении. Они содержат значительное количество свободных аминокислот, азотистых веществ (до 24%), золных элементов (около 8%), клетчатки (14%), экстрактивные безазотистые вещества составляют 42%. В их состав может входить также до 5-6% зерновых примесей, представляющих собой обломки зерен солода. Солодовые ростки можно вносит в среды непосредственно или в виде их экстрактов.
Пивная дробина является отходом пивоварения. Ее выход составляет 22% сухой массы сырья, поступающего в варочное отделение. Она может использоваться непосредственно во влажном состоянии (влажность 83%), если производство ферментных препаратов организовано при пивоваренном заводе, или же в сухом виде. Дробина имеет желтовато-коричневый цвет, приятный свежий запах. Она содержит значительное количество белковых веществ (26-27%), жир (7-8 %), клетчатку (17-18%), зольные элементы (4-5%), безазотистые экстрактивные вещества (около 44%).
Другой отход пивоварения - осадочные пивные дрожжи. Их выход при влажности 85% составляет 1,5-2 л на 10 дал пива. Отвар дрожжей или их автолизат может служить прекрасным обогатителем питательных сред, источником биологически активных и легкоусвояемых веществ. Пивные дрожжи богаты белковыми веществами (44-55%) и углеводами (30-40%), они содержат значительное количество минеральных солей (зольность 7-9%). При использовании пивных дрожжей как компонента сред для ферментной промышленности требуется их обязательная очистка от хмелевых горьких веществ.
В качестве сырья также можно использовать биомассу других микроорганизмов, например плазмолизированные кормовые дрожжи, пропионовые бактерии (отход производства витамина В12), экстракты из мицелиальных масс и т.д. Состав этих компонентов довольно близок, но различается содержанием и набором ростовых веществ и стимуляторов. Наметилась тенденция использовать гидролизаты биомасс микроорганизмов, которые получают различными способами.
Для приготовления питательных сред можно использовать отход спиртового производства - фильтрат барды. Для этого фильтрат обогащают мукой или заторной массой и добавляют мел для нейтрализации излишней кислотности; фильтрат барды является нестандартным продуктом.
Для приготовления питательных сред может использоваться измельченный картофель или его отвар. Картофель содержит большое количество влаги (до 75%), а основная часть сухого вещества приходится на крахмал. В зависимости от года, сорта и условий выращивания картофеля содержание крахмала может быть от 8 до 27%, в среднем 18-19%. В картофеле азотистых веществ сравнительно мало, не более 2%, клетчатки содержится 1-1,5%; зольные элементы составляют 0,8-1% (К, Nа, Mg, Са, Fe, Si и др.). В малых количествах найдены микроэлементы - марганец, медь, кобальт, никель, йод и т. д. Картофель содержит витамины С,А и целый ряд других веществ в сумме 2,2-2,5%.
Свекловичный жом представляет собой измельченную сахарную свеклу после извлечения из нее сахарозы и некоторых других веществ на диффузионных установках сахарных заводов. Состав жома многокомпонентен, основную его массу составляют безазотистые экстрактивные вещества (66%), в которые входят пектиновые вещества, гемицеллюлозы. В жоме содержится белок (около 8%), клетчатка (22%), зольные элементы (4%).
К числу редко используемых компонентов питательных сред можно отнести казеин и его гидролизат, рыбную муку, рисовые отруби, картофельную мезгу, выжимки плодов, ягод и овощей и т. д.
Для пеногашения используют жиры и масла, которые также могут быть источником питания для микроорганизмов. Чаще всего используют животные жиры, олеиновую кислоту, подсолнечное, соевое, хлопковое, кукурузное масла. Из всех перечисленных пеногасителей рациональнее всего вводить при выращивании олеиновую кислоту, так как остальные масла имеют пищевую ценность и используются в пищевой промышленности. Постепенно они заменяются синтетическими пеногасителями.
При выборе питательной среды для культивирования микроорганизмов необходимо учитывать не только качественный состав среды, но и количественное соотношение ее компонентов. Чрезмерное увеличение концентрации в среде хотя бы одного из них приводит к увеличению осмотического давления и нарушению обмена веществ клетки и угнетению биосинтетической способности клетки и замедлению ее развития и роста. Но в ряде случаев компоненты среды, тормозящие накопление биомассы, могут способствовать активному синтезу клеткой некоторых ферментов.
II.3 Принцип подбора состава сред для поверхностного способа культивирования
При поверхностном культивировании на твердой среде основой почти всех сред являются пшеничные отруби. Среда может быть обогащена некоторыми рыхлителями. В качестве основы среды можно использовать - биошрот, представляющий собой нерастворимый остаток культуры после экстракции ферментов. Но биошрот может быть использован только при обогащении среды крахмалом (картофельная мезга) и ростовыми веществами, вносимыми с солодовыми ростками. При использовании пшеничных отрубей важно установить содержание в них крахмала (должно быть не менее 16-20%). Увеличение содержания крахмала с 6,37 до 23,17 % благоприятно сказывается на биосинтезе всего амилолитического комплекса, особенно а-амилазы, накопление которой в среде возрастает в 2,5 раза. Количество крахмала в отрубях должно быть не менее 16-20%. Помимо пшеничных отрубей при культивировании продуцентов амилаз можно использовать пивную дробину, обогащенную крахмалсодержащей разваренной массой, поступающей из спиртового производства. Варьируя состав среды с учетом физиологических особенностей продуцента и индуцированного характера синтезируемых ферментов, можно получить поверхностную культуру, содержащую желаемый комплекс ферментов.
II.4 Принцип подбора состава сред для глубинного выращивания продуцентов
При составлении питательных сред для глубинного культивирования продуцентов ферментов можно применять малорастворимые компоненты. Но и их количество должно быть ограниченным, так как высокое содержание нерастворимых остатков приводит к ухудшению реологических свойств среды и затрудняет последующую обработку среды и культуральной жидкости. Целесообразнее использовать в составе среды отвары и гидролизаты отходов растительного сырья (отрубей, солодовых ростков, свекловичного жома и т.д), а также грубые фильтраты спиртовой барды, гидролизаты или плазмолизаты микробной биомассы, реже - отдельные аминокислоты. Отсутствие крупной взвеси особенно важно при непрерывном процессе культивирования. Питательные среды готовят на водопроводной воде, содержание сухого вещества в них колеблется от 2,5 до 20% в зависимости от физиологических потребностей продуцента или состава целевого ферментного комплекса; рН питательных сред контролируют в момент приготовления среды, а также после ее стерилизации.
Гидролитические ферменты чаще всего имеют индуцибельную природу, и поэтому в состав среды обязательно включается вещество - индуктор, способствующее наиболее интенсивному накоплению культурой соответствующего фермента.
Источники углерода. Углерод крайне необходим микроорганизмам, так как он определяет основные метаболические пути любого организма. Источниками углерода могут быть самые различные органические соединения, они могут быть использованы в качестве скелетного материала при построении клеточного вещества и в качестве источника энергии.
Страницы: 1, 2, 3, 4
