при большей вирулентности первых.

По нашим данным изменения в лёгких, плевре, перикарде и перитонеуме

ассоциируются с локализацией в них возбудителя. Частота изоляции культур

H.parasuis из тканей и органов зависит от характера болезни и давности

процесса. При остром течении в результате экспериментального (трахеального)

заражения через 48-72 часа из лёгких культуры возбудителя выделили в 100%

случаев, плевры - 75%, перитонеума и перикарда -25%, бронхиальных

лимфатических узлов - 100%, селезёнки - 50%, крови - 25% случаев. При

бактериологическом исследовании поросят, павших с картиной острого

полисерозита, в естественных условиях культуры возбудителя выделили из

лёгких у 42,85%, перикарда - 92,2%, плевры - 71,42%, печени - 57,14%,

селезёнки - 66,66% животных. В более отдалённые сроки после

экспериментального заражения и от животных, павших в естественных условиях

с картиной подострого полисерозита, возбудитель выделяли реже и

преимущественно из плевры, лёгких, перикарда, перитонеума и средостенных

лимфоузлов.

Анализ возрастной заболеваемости поросят гемофилёзным полисерозитом

показал, что пик отхода приходится на возраст 35-60 дней. Появление отхода

поросят с явлениями гемофилёзного полисерозита совпадает со снижением титра

колостральных антител к H.parasuis (серовар Д), увеличением уровня

колонизации возбудителя в респираторном тракте. Согласно полученным данным,

H.parasuis является достаточно обычным компонентом нормальной микрофлоры

слизистых путей и на фоне описанных изменений, наряду с другими

этиологическими агентами, участвует в возникновении пневмоний у поросят

данной возрастной группы и ряде случаев это сопровождается развитием

септической стадии с поражением серозных оболочек, суставов и головного

мозга.

2.1.5.Обоснование критериев отбора материала для

бактериологического исследования на актинобациллёзную пневмонию и

гемофилёзный полисерозит.

Гемофилёзный полисерозит. Данные о диссеминации возбудителя

свидетельствуют о наибольшей частоте его выделения из поражённых серозных

оболочек, серозно-фибринозного экссудата. Выделение чистой культуры

возбудителя наиболее вероятно при исследовании пунктата из поражённых

суставов и перикарда. В замороженном патологическом материале H.parasuis

сохраняет жизнеспособность до 30 суток (режим хранения -18(С).

Актинобациллёзная плевропневмония. Независимо от характера течения

болезни возбудитель закономерно обнаруживается в поражённой ткани лёгких и

регионарных лимфатических узлах, что определяет характер материала,

отбираемого для бактериологического исследования. В патологическом

материале, заключённом в водно-глицериновую смесь ( температура хранения

4 --6(С), возбудитель сохраняет жизнеспособность в течение 15 суток, в

замороженном тканевом материале – до 45 суток.

6. Серологическая идентификация культур H.parasuis

A.pleuropneumoniae.

7. Методы и результаты серологической идентификации культур

H.parasuis.

Использовали кроличьи гипериммунные сыворотки против типовых штаммов

сероваров А, В, С, Д.

Дифференциация сероваров H.parasuis в пробирочной РА показала её

малую специфичность. Более эффективной для указанной цели оказалась РСК с

растворимыми антигенами.

Исследование в РСК с типовыми сыворотками 46 эпизоотических культур

H.parasuis, выделенных при генерализованных серозитах, позволило 47,82%

культур отнести к известным сероварам Бакоса. Штаммы серовара А составили

15,2%, В - 17,39%, С - 2,17%, Д-13,04%. В группе штаммов, выделенных из

лёгких при пневмониях (18шт), культуры серовара А составили 16,6%, В -

11,1%, С - 5,56%, Д -33,3%, нетипируемые -33,3%. В числе культур,

выделенных из носовой слизи клинически здоровых свиней (14 шт.), 35,7%

отнесены к серовару А, 14,2% -- к серовару Д, не удалось типировать 50%

штаммов.

В целом по всей группе из 78 штаммов H.parasuis было отнесено к

серовару А - 19,23%, В - 12,82%, С - 2,56%, Д - 17,95%, нетипируемые

культуры составили 47,44%.

Исследование нетипируемых культур в РСК свиноводства атисыворотками

против изоляторов этой же категории показало наличие ещё трёх

серологических вариантов и часть культур осталась за пределами этих групп.

Полученные данные позволяют заключить, что необходимо расширение числа

сероваров на базе схемы Бакоса, либо требуется создание новой схемы

серовариантной дифференциации с новыми типовыми штаммами.

Анализ серотиповой структуры культур, выделенных в пределах одного

хозяйства показал ассоциацию с генерализованными серозитами свиней

H.parasuis различной серовариантной принадлежности.

2.1.6.2. Методы и результаты серологической идентификации

культур A.pleuropneumoniae.

Для серовариантной дифференциации культур A.pleuropneumoniae

испытывали РА пробирочную, РА с 2-МЭ, РА на стекле, РНГА, РНГА с 2-МЭ, РКА

пробирочную на стекле, двухступенчатую РИФ. При внутривидовой

дифференциации в различных серологических реакциях типовых культур

A.pleuropneumoniae (серовары 1,2,3,4,5,6,7,8, 10,12) установлены

перекрёстные реакции между сероварами 3,6 и 8, 2 и 3, 1 и 2, 4 и 7.

Исследование двухсторонних антигенных связей в большинстве случаев

позволяет определить серовариантную принадлежность культур. Из группы

ускоренных серологических реакций для серологической идентификации наиболее

перспективна РКА с растворимыми антигенами.

При серологической идентификации 82 эпизоотических НАД--зависимых

культур бактерий, выделенных при фиброзно-геморрагических пневмониях свиней

и классифицированных как A.pleuropneumoniae отнесены к серовару 2 -12,9%, 3

-14,53%, 4 -8,53%, 6 -3,65%, бактериям «малой группы» -7,31%. Большую

группу штаммов серологически идентифицировать не удалось. Культуры

последней группы имели антигенное родство с сероварами 3,6,8,10, но при

исследовании в перекрёстной РА с адсорбцией были не идентичны им.

2.1.7. Результаты изучения широты распространения сероваров

A.pleuropneumoniae на основании серологических исследований.

Была предпринята попытка дать оценку циркуляции различных сероваров

A.pleuropneumoniae в свиноводческих хозяйствах одной из областей

центральной России по результатам серологических исследований. В РНГА

исследовали 639 сывороток крови свиней из десяти хозяйств. Установлено

преобладание антител к сероварам 1,4,6,3,2,12. При бактериологическом

исследовании в данном регионе культур сероваров 1 и 12 не выделяли. Причины

такой ситуации требуют дальнейшего изучения. В сыворотках крови некоторых

серопозитивных свиней удалось выявить нейтрализующие антитела к гемолизинам

A.pleuropneumoniae, что свидетельствует о наличии определённого иммунитета

к A.pleuropneumoniae.

2.1.8. Разработка и апробация ускоренных серологических методов

обнаружения антигенов A.pleuropneumoniae в патологическом материале.

Для обнаружения антигенов A.pleuropneumoniae непосредственно в

тканевом материале были испытаны реакции коагглютинации (РКА) и

двухступенчатой иммунофлуоресценции (РИФ).

Опыты показали, что РКА может быть использована для видовой и

серотиповой идентификации A.pleuropneumoniae. Серотиповую специфичность

результатов РКА удаётся повысить путём уменьшения дозы сыворотки для

сенсибилизации носителя и использования в реакции растворимых капсульных

антигенов. Более активные видовые диагностикумы удалось сконструировать при

использовании поливалентных сывороток, полученных от кроликов,

иммунизированных не моноантигенами, а смесью антигенов A.pleuropneumoniae

различных сероваров. Использование РКА как метода видовой идентификации

потребовало выяснения межвидовых антигенных связей A.pleuropneumoniae.

Изучали антигенное родство данного вида бактерий с A.suis, A.lignieresii,

P.multocida (А,В,Д), H.parasuis (A,B,C,Д), B.bronchiseptica, S.cholerasuis,

S.tiphimurium. Наиболее выраженное антигенное родство установлено с A.suis

и A.lignieresii, наличие которых в исследуемом материале может обусловить

ложноположительные результаты РКА.

Серовариантную дифференциацию типовых культур A.pleuropneumoniae

проводили в РИФ с предельными разведениями антисывороток первой ступени,

обеспечивающими свечение клеток свиноводства гомологичными реагентами на

четыре креста. Обнаружили перекрёстные реакции сероваров 1 и 2, 2,3 и 6,

3,2,6 и 8, 4 и 7, 10 и 12. Таким образом, надёжной серовариантной

дифференциации в ряде случаев добиться не удалось. Слабые перекрёстные

реакции интенсивностью на два креста получены с культурами A.suis,

A.lignieresii. Не отмечено перекрёстных реакций с P.multocida (А,В,Д),

H.parasuis (А,В,С,Д), E.coll, S.cholerasuis и S.tiphimurium.

При изучении специфичности РКА как метода обнаружения антигенов

возбудителя в органах и тканях исследовали супернатанты тканевых (лёгочных)

гомогенатов клинически здоровых свиней, морских свинок и получили

неспецифические замедленные положительные реакции. Для устранения

неспецифической аглютинации стафилококковые антительные диагностикумы

дополнительно обрабатывали нормальной кроличьей сывороткой, увеличивали

концентрацию альбумина в диагностикуме, прогревали исследуемый материал при

100(С (10,60 мин.) 120(С (15 мин.). Эффективной оказалась термическая

обработка материала. Необходимость прогревания исследуемого материала

заставила рассмотреть влияние этого фактора на антигены возбудителя.

Известно, что клетки A.pleuropneumoniae содержат специфические

термостабильные и – лабильные антигены (K.Mittal et al., 1987). Изучение

этого вопроса показало, что по термостабильности антигенов культуры можно

подразделить на группу термоустойчивых (сер.2,3,6,8,10) и термолабильных

(сер.1,7, штамм 202). У культур последней группы при кипячении (60 мин.)

снижалась активность антигенов в серологических реакциях, особенно

антигенов серовара 1 (шт.ССМ5869). Прогревание антигенов A.pleuropneumoniae

при 100(С в течении 10 минут на серологической активности антигенов

возбудителя, кроме серовара 1 не сказывается.

Возможность выявления антигенов возбудителя в тканевом материале

(лёгкие), при помощи РКА и РИФ первоначально изучали на морских свинках,

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7